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Curiosis血细胞计数板除了要会用,还要注意这些事情!

点击次数:170 发布时间:2020-12-11

    Curiosis血细胞计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血细胞计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中,在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的(0.1或0.4mm2),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和,故又称为总菌计数法。适用于稀释的菌悬液(或孢子悬液),即液体培养基中菌体的计数。

    Curiosis血细胞计数板操作步骤:

    1.稀释

    将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释,菌液如不浓,可不必稀释。

    2.镜检计数室

    在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。若有污物,则需清洗后才能进行计数。

    3.加样品

    将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片,再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。(此处浙科版课本P73有误)注意不可有气泡产生。

    4.显微镜计数

    静止5分钟后,将血细胞计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀,需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。每个计数室选4或5个中格中的菌体进行计数。

    镜检计数方法:①方格内细胞的计数顺序为左上→右上→右下→左下。②压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数。③酵母细胞若有粘连,要数出团块中的每一个细胞。④出芽酵母的芽体体积若超过细胞体积的1/2,则算独立个体。⑤计数总数不少于300个细胞。

    5.清洗血细胞计数板

    使用完毕后,将血细胞计数板在水笼头上用水柱冲洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检,观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复洗涤至干净为止。

    Curiosis血细胞计数板注意事项:

    (1)进行计数前,应先将试管摇匀,目的是使酵母菌在培养液中混合均匀,以减少计数误差。

    (2)显微镜计数时,对于压在小方格界线上的酵母菌,应取相邻两边及顶角计数。

    (3)若一个小方格内酵母菌数量过多,难以数清时,则可将培养液稀释一定倍数后再计数。

    (4)本实验无另设对照实验,酵母菌每天的数量变化可形成前后对照。

    (5)血细胞计数板使用后,切勿用硬物洗刷,可采用浸泡和冲洗的方法清洗。
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